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Quantifi zierung von Protein-Interaktionen Massenspektrometer QTRAP-5500 ?? 87 ? AB Sciex, Darmstadt, Tel.
06151/35200-0, Fax 35200-99, www.absciex.com Ein Wissenschaftlerteam, darunter der Kyoto-Preisträger Tony Pawson, Ph.D., und Nicolas Bisson, Ph.D.
vom Samuel Lunenfeld Research Institute der Mount Sinai Klinik in Toronto, hat einen neu- en Ansatz zur Proteinquantifi zierung entwickelt.
Die Besonderheit dabei ist die Kombination von Affi nitätsaufreini- gung mit Multiple Reaction Monitoring (MRM) – basierend auf den QTRAP®- und Eksigent-Techniken von AB SCIEX.
Die Methode erlaubt Forschern, Prote- in-Protein-Wechselwirkungen in ihrem zeitlichen Verlauf zu messen.
Vor allem bei Interaktionen, die als Antwort auf bestimmte Zellvorgänge stattfi nden (z.B.
im Zusammenhang mit Krebs oder anderen schweren Erkrankungen) ist die neue Anwendung von Bedeutung.
Bislang gab es nur wenige Möglich- keiten zur Quantifi zierung von Pro- tein-Interaktionen.
Besonders bei der Untersuchung von Adapterproteinen, die aktivierte Rezeptoren mit ihren zy- toplasmatischen Effektoren verbinden, war es schwierig, quantitative Daten zur Assoziation und Dissoziation der Protei- ne in Proteinkomplexen zu gewinnen.
Um dieser Herausforderung zu begeg- nen, arbeitete das Lunenfeld-Institut ge- meinsam mit AB SCIEX an einer Metho- de, die das AB SCIEX QTRAP-5500-System in Verbindung mit dem Eksigent NanoLC Ultra + cHiPLC nanofl ex Liquid-Chroma- tography-System verwendet.
Es entstand eine neue Versuchsanordnung, mit der die kanadischen Forscher den zeitlichen Verlauf von Protein-Interaktionen mit dem Adapterprotein GRB2 untersuchen konnten.
GRB2 ist ein wichtiger Knoten- punkt von Wachstumsfaktor-Signalwe- gen.
Die Wissenschaftler konnten mit der neuen Affi nitäts-MRM-Technik eine große Anzahl von Proteinen identifi zie- ren und deren Dynamik bei der Interak- tion quantifi zieren.
Das Verfahren sowie die Forschungsergebnisse wurden kürz- lich online im biomedizinischen Journal Nature Biotechnology vorgestellt.
Das AB SCIEX QTRAP-5500-System ist ein Massenspektrometer, das die quanti- tative und qualitative Analyse auf einer Plattform vereint.
Ein Triple-Quadrupol- System zur quantitativen Messung wird hierfür mit einer linearen Ionenfallen- Technik zur Bestätigung der Ergebnisse im selben Experiment kombiniert.
Dr.
Nicolas Bisson: „Wir wollten Signal- wege besser verstehen lernen und an- deren Wissenschaftlern die Erforschung von Protein-Interaktionen erleichtern.
Unser neuer Ansatz wird vor allem bei den Haupt-Knotenpunkten von Protein- Protein-Wechselwirkungen helfen, ein quantitatives Bild dynamischer Interak- tionsvorgänge und Netzwerkbildungen zu erzeugen.“
