HPLC-MS in der Spurenanalytik

Durch die Einführung neuer Ionisations- und Massendetektionstechniken hat die hochauflösende Flüssigchromatographie (HPLC) gekoppelt mit Massenspektrometrie (MS) in den letzten 15 Jahren einen ungeahnten Aufschwung genommen. Die Aufnahme vollständiger Massenspektren sowie die "on-line" Strukturaufklärung mittels multipler Massenspektrometrie (MSn die sequentielle Generierung von Sequenzen von Tochterionenspektren) sind heute in Realproben mit nur wenigen ng Substanz möglich. Nachweisgrenzen liegen oft im untersten pg-Bereich. Damit ist die HPLC-MS der HRGC-MS fast ebenbürtig geworden. Gegenüber letzterer Technik gibt es allerdings auch bedeutende Unterschiede. Die Interpretation der Massenspektren zur Strukturaufklärung verlangt mehr Erfahrung und die HPLC verursacht im Spurenbereich nicht zu unterschätzende Probleme durch Säulenbluten, ungenügende Lösungsmittel- und Wasserqualitäten sowie Adsorptionen an aktiven Oberflächen.

In einer Übersicht werden zunächst die in der HPLC-MS gebräuchlichsten Ionisations- und Massentrennprinzipien vorgestellt und ihre Funktionsweise sowie Vor- und Nachteile diskutiert. Mit Hilfe von praktischen Beispielen aus der Rückstands- und Lebensmittelanalytik (Biotoxine, Alkaloide, bioaktive Moleküle und Bisphenol-Oligomere (BADGE)) wird gezeigt, wie man Interferenzen und Störungen durch Kontaminationen vermeiden kann und wie man Strukturen unbekannter Verbindungen teilweise oder sogar vollständig mittels MS/MS und MSn aufklären kann. Ein weiterer Schwerpunkt sind die Quantifizierung und Methodenvalidierung. Der Kurs beschränkt sich auf die Anwendung der HPLC-MS auf niedermolekulare Verbindungen (typischerweise Masse 200-500, ausnahmsweise bis ca. 3000 u).

Leitung
Prof. Dr. Michael Oehme, Institut für Angewandte analytische Chemie, Niederteufen (Schweiz)

Inhalt

• Ionisationsmechanismen in der HPLC-MS

Generelle Anforderungen an API-Ionenquellen - Ionisationsmechanismen Elektrospray-Ionisation (ESI): Prinzip, Anwendungsbereiche Stoffklassen, Einfluss Fluss und Eluentzusammensetzung, Matrixeffekte, mehrfach geladenen Ionen, Koordinations-Ionenspray-Ionisation, Derivatisierung - Chemische Ionisation bei Atmosphärendruck (APCI): Prinzip, Protonenübertragung und Protonenaffinitäten, Einfluss von Puffern, Stoffklassen - Weitere ungewöhnliche Ionisationstechniken.

• Massentrennung und Detektion

Prinzipien der verschiedenen Massentrennsysteme (Quadrupol, Ionenfallen, Flugzeit-MS, Magnetgeräte) - MS/MS und MSn-Techniken - Ionentransfer und -fokussierung -Vor-, Nachteile und Anwendungsbereiche

• Praktische Probleme

Übersicht Störfaktoren - Wasser/Lösungsmittel Gradienten - Entgasung - Säulenbluten - Adsorptionen - Kontaminanten aus Geräten - Überführungskapillare - Unterdrückung der Ionisation - Linearität - Ionen/Moleküladdukte - Flussabhängigkeit - Kombinierte Ursachen.

• Strukturaufklärung in der LC-MS

Prinzipien der Strukturaufklärung - Vollkommen unbekannte Struktur: Information aus Molekülionen, Fragmentierungen, Ionenaddukten - Mit bekannter Verbindungsklasse verwandt - LC-MS-Bibliotheken - Beispiele von Strukturaufklärungen (Carbonyle, Biotoxine, Amphetamine, Epoxyoligomere etc.) inklusive "on-line"-Strukturaufklärungen.

• Quantifizierung

Einsatz von internen Standards - Vorgehen an Hand eines praktischen Beispiels (Mykotoxine): Experimentelle Bedingungen - Probenreinheit - Methodenvalidierung (Nachweisgrenzen, Linearität etc.) - Quantifizieren mit internen Standards - Erstellen von Qualitätssicherungskriterien.

• Reinigung und Unterhalt

Unterhalt Vakuumpumpen - Qualität Pumpenöle etc. - Zusätzliche Sicherheitselemente - Belüftungsverfahren - Auch Isolatoren müssen gereinigt werden - Metallteile: Polieren, nicht verkratzen.

Teilnahmegebühr
Mitgliedergebühr:		1.180,00 EUr		Nichtmitgliedergebühr:		1.280,00 EUR
mehrwertsteuerfrei, einschließlich veranstaltungsgebundener Arbeitsunterlagen sowie Mittagessen und Pausengetränken

Weitere Informationen

Veranstalter:

HAUS DER TECHNIK e.V.
Hollestr. 1
45127 Essen
Deutschland
Tel.: + 49 (0) 201/18 03-1 (Zentrale)
Fax: + 49 (0) 201/18 03-269 (Zentrale)
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