Labo Online - Analytic, Labortechnik, Life Sciences

HPLC-TippDer HPLC-Tipp

Kleine Tipps zur Fehlersuche und Robustheit II

sep
sep
sep
sep

Von Dr. Stavros Kromidas, Saarbrücken

•Wir haben uns bereits über folgenden Trick unterhalten (s. Tipp Nr. 37 in: Stavros Kromidas „HPLC-Tipps Band 2“: Im niedrigen Wellenlängen-Bereich haben wir bei einem Wasser/Acetonitril-Gradienten häufig mit einer störenden Drift zu kämpfen, weil eine große UV-Differenz zwischen Wasser und Acetonitril herrscht und genau jene wird ja vom UV-Detektor registriert. Um die UV-Absorption nun zwischen Wasser und Acetonitril auszugleichen kann man zum Beispiel 1 Tropfen HNO3 pro Liter Wasser verwenden, die Drift wird stark reduziert. Ich höre in Seminaren diesbezüglich den Einwand, dass HNO3 eventuell den pH-Wert des Eluenten verschieben könnte (bei dieser Menge glaube ich zwar nicht, aber na ja...) bzw. HNO3 könnte die Wechselwirkungen der Analyten mit der stationären Phase beeinflussen. Okay, verwenden Sie alternativ 1...2 Tropfen Aceton, es ist in diesen Mengen chromatographisch sicherlich inerter als HNO3 und erfüllt den gleichen Zweck.

Anzeige

•Haben Sie auf einmal Doppelpeaks? Ich würde folgende Vorgehensweise vorschlagen, um vielleicht die Ursache zu finden: Injizieren Sie erneut. Ist der Peak jetzt okay, war es eine einmalige Luftblase/einmalig eluierende Verunreinigung. Erscheint der Peak bei der erneuten Injektion weiterhin als Doppelpeak und kann eine Koelution mit einer weiteren Komponente ausgeschlossen werden (weniger injizieren, die Trennung würde in diesem Fall besser werden), liegt es aller Wahrscheinlichkeit nach an einer blockierten Fritte (Ablagerungen, Niederschlag, Algen) oder an einem Totvolumen am Säulenkopf. Abhilfe: Fritte erneuern und/oder Säule umdrehen. (Mancher HPLC-„Freak“ legt die Säule für ein Paar Minuten ins Ultraschallbad, da sie ohnehin so nicht zu gebrauchen ist). Bleibt das Problem bestehen, so handelt es sich womöglich um den seltenen Fall, dass betreffende Komponente bei diesen Bedingungen in zwei Formen vorliegt (solvatisiert/nicht solvatisiert, ionisiert/nicht ionisiert, Monomer/Dimer). In diesem Fall variieren Sie den Eluenten/den pH-Wert geringfügig, das Problem müsste so auf zu heben sein.

•Unterschätzen Sie nicht Temperatur-Differenzen! Dass tiefgefrorene Proben oder Standardlösungen eine nicht unbeträchtliche Zeit brauchen, um die Umgebungstemperatur im Labor anzunehmen, ist sicherlich bekannt. Man denkt in diesem Zusammenhang sicherlich auch an die Temperaturabhängigkeit des Volumens (Injektionsvolumen), der UV-Absorption, der Viskosität (Ansauggeschwindigkeit beim Aufziehen in der Spritze). Dies alles kann zur Instabilität bzw. Drift in der Peakfläche führen. Man sollte aber auch an einfache(...) Sachen denken: Zum Beispiel wird einmal 1 Liter, das nächste Mal 5 Liter Eluent im Kühlschrank aufbewahrt. Es liegt auf der Hand, dass im zweiten Fall das Vorratsgefäß eine längere Zeit benötigt, um die Umgebungstemperatur anzunehmen. Ergebnis: Anderer Druck und (wichtiger!) womöglich eine unterschiedliche Temperatur-Differenz zwischen Eluent und Säule und damit Verschiebung der Retentionszeiten.© by Stavros Kromidas

Anzeige
Diesen Artikel …
sep
sep
sep
sep
sep

Weitere Beiträge in dieser Rubrik

HPLC-TippSehr kleine Peaks – was kann ich tun?

Nehmen wir an, Sie müssen Komponenten in einer extrem geringen Konzentration quantifizieren – die Peaks sind einfach sehr klein. Es geht also im vorliegenden Fall vordergründlich nicht um eine gute Auflösung, es geht um eine gute Detektierbarkeit.

…mehr
HPLC-Tipp: Welchen Detektor soll ich verwenden?

HPLC-TippWelchen Detektor soll ich verwenden?

Welchen Detektor soll ich verwenden? Die Frage ist trivial und schwer zugleich.

…mehr
Dynamische Mischkammer mit Magnetrührstäbchen

HPLC-TippGeisterpeaks durch Rückstände in der Mischkammer

In einer von mehreren Benutzern abwechselnd gefahrenen HPLC-Gradientenanlage treten immer wieder unerklärliche Störungen im Chromatogramm auf, die auch durch intensives Spülen nicht zu beseitigen sind.

…mehr

HPLC-TippAnalytischer Methodentransfer von HPLC-Methoden – Teil 3

Im zweiten Teil der Kleinen-Tipps-Serie zum Methodentransfer von HPLC-Methoden hat Mike Hillebrand auf fehlende Infos beim Methodentransfer hingewiesen. Fehlende Infos dürften in der Tat eine der häufigsten Ursachen für missglückte Methodentransfers sein. Im dritten und letzten Tipp zu diesem Thema greife ich daher diese Problematik erneut auf.

…mehr
Methodentransfer

HPLC-TippAnalytischer Methodentransfer von HPLC-Methoden – Teil 2

Der zweite Teil der Reihe „Analytischer Methodentransfer“ befasst sich mit Fallstricken im HPLC-Methodentransfer im Zusammenhang mit den verwendeten Materialien und dem Equipment.

…mehr
Anzeige

Bildergalerien bei LABO online

Anzeige

Jetzt den LABO Newsletter abonnieren

LABO Newsletter abonnieren

Der kostenlose LABO Newsletter informiert Sie wöchentlich über neue Produkte, Lösungen, Technologietrends und Innovationen aus der Branche sowie Unternehmensnachrichten und Personalmeldungen.

Anzeige
Anzeige

Mediaberatung