Testlösung
Zellproliferation und Zellvitalität kolorimetrisch bestimmen
Die Lösung „ROTITEST®Vital“ von Carl Roth ist eine kolorimetrische Lösung zur Bestimmung von Zellproliferation und -vitalität.
Nach Herstellerangaben ist ein Milliliter der Lösung ausreichend für die Zählung von 100 Zellproben und damit seien hoch sensitive Vitalitäts-Assays durch die nicht-radioaktive Zählung proliferierender Zellen möglich. Das Wirkungsprinzip basiert auf dem Tetrazoliumsalz WST-8, welches als Akzeptor für die NADH/NADPH-Dehydrogenase fungiert und dabei zu dem gelb gefärbten Formazan-Farbstoff reduziert wird. Die Menge des Formazan-Farbstoffs, die durch die Aktivität der Dehydrogenasen in proliferierenden Zellen entsteht, ist direkt proportional zur Anzahl lebender Zellen und kann photometrisch gemessen werden. Im Vergleich zu MTT-basierenden Assays sei nach Anbieterangaben sei „ROTITEST®Vital“ 8-fach stabiler und 5-fach sensitiver. Zudem kann das wasserlösliche WST-8 als Ein-Komponenten-System direkt auf die in Nährmedien kultivierten Zellen gegeben werden. Aufgrund der nichtpermeablen Eigenschaften bleiben die Zellen vital und können direkt in Down-stream-Assays eingesetzt werden.
Die Testlösung wird direkt in 96er-Wells mit kultivierten Zellen gegeben. Während der Inkubationszeit von einigen Stunden wird von lebenden Zellen ein wasserlöslicher Formazan-Farbstoff (orange) gebildet und in das Zellkulturmedium abgegeben. Die resultierende Farbe wird photometrisch gemessen (Wellenlänge ca. 450 nm). Die Testlösung kann auch bei Phenolrot-haltigen Medien verwendet werden. Sie ist in Verpackungseinheiten zu 1 ml, 5 ml und 20 ml erhältlich. Die nicht-toxische Lösung ist stabil bei Raumtemperatur und sehr stabil unter Kühlung, darf aber nicht einfrieren, und sie muss lichtgeschützt gelagert werden.
Quelle: Carl Roth
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