Seit etwa 30 Jahren gibt es pharmazeutisch hergestellte monoklonale Antikörper (mAbs). Sie sind vielfältig medizinisch nutzbar und werden in der Diagnostik wie auch in der Therapie eingesetzt. Krankheiten, die mit monoklonalen Antikörpern behandelt werden, sind beispielsweise chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen (Morbus Crohn und Colitis ulcerosa) oder verschiedene Krebserkrankungen, wie etwa Brustkrebs.

LC-MS/MS-Bestimmung von monoklonalen Antikörpern

Ein klassisches Verfahren monoklonale Antikörper im Blut zu analysieren, sind Ligandenbindungstests (Ligand Binding Assay, LBA). Die Methodenerstellung ist zeitintensiv, teuer und fehleranfällig, da es hier zu einer Kreuzreaktion kommen kann. Neben LBAs werden auch zunehmend massenspektrometrische Bestimmungen von therapeutischen monoklonalen Antikörpern im Serum oder Plasma eingesetzt, etwa für pharmakokinetische Studien in der präklinischen, klinischen und therapeutischen Phase. Diese Methode bietet eine höhere Selektivität gegenüber LBAs. Darüber hinaus erfordert der LC-MS/MS-Ansatz weniger Methodenentwicklungsarbeit; sie ist bereits innerhalb von Tagen statt mehrerer Monate abgeschlossen. Das von Shimadzu entwickelte nSMOL-Antikörper-Kit standardisiert hierbei den Probenvorbereitungsworkflow und verbessert die Empfindlichkeit des massenspektrometrischen Assays. nSMOL steht für: nano-surface and molecular-orientation limited proteolysis.

Wie funktioniert das nSMOL-Kit?

Das Ready-to-use nSMOL-Kit ermöglicht die selektive Proteolyse von Antikörpern. Hierbei werden nach der Anreicherung über Immunglobuline die FAB-Regionen (antigen-binding fragment) von mAbs mit Hilfe von Trypsin-immobilisierten Nanopartikeln proteolytisch abgebaut (Bild 2).

Sensitivitätserhöhung durch Nexera Mikros

Die Peptide können anschließend über MRM-Analyse mittels Triple-Quadrupol-Massenspektrometer quantifiziert werden. Aus Erfahrung bieten kleinere Flussraten höhere Sensitivitäten; hingegen führen höhere Flussraten zu einer höheren Robustheit des Systems. Die Nexera Mikros als Micro-Flow LC-MS-System vereint hierbei „das Beste aus zwei Welten“ und bietet eine gesteigerte Empfindlichkeit und eine hohe Robustheit.