Exzision viraler Vektoren aus iPS-Zellen unter Verwendung von zellmembrangängigem TAT-Cre-ProteinEffiziente Gewinnung transgenfreier iPS-Zellen
In diesem Artikel beschreiben wir die effiziente Erzeugung von transgenfreien murinen und humanen iPS-Zellen durch Verwendung eines Cre-exzidierbaren polycistronischen lentiviralen Vektors, der die "Stammzellkassette" (STEMCCA™ cassette) exprimiert, die alle vier Transkriptionsfaktoren enthält, gefolgt von der Exposition der voll reprogrammierten iPS-Zelle gegenüber dem rekombinanten zellmembrangängigen TAT-Cre-Protein.
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Bild 2: (A). Purifikation des rekombinanten TAT-Cre aus Bakterien, gemäß Analyse mittels SDS-PAGE und nach Coomassie®-Brilliant-Blau-Färbung (B). Die Bahnen repräsentieren Folgendes: 1 - Gesamte Lysate; 2 - Unlösliche Fraktion; 3 - Überstand; 4 - Durchfluss; 5 - Kontrolle; 10 - einstündige IPTG-induzierte Kultur. Die Zahlen am linken Rand geben das Molekulargewicht (kDA) der Markerproteine an. Das Cre-Protein hat etwa 41 kDa.