Exzision viraler Vektoren aus iPS-Zellen unter Verwendung von zellmembrangängigem TAT-Cre-ProteinEffiziente Gewinnung transgenfreier iPS-Zellen
In diesem Artikel beschreiben wir die effiziente Erzeugung von transgenfreien murinen und humanen iPS-Zellen durch Verwendung eines Cre-exzidierbaren polycistronischen lentiviralen Vektors, der die "Stammzellkassette" (STEMCCA™ cassette) exprimiert, die alle vier Transkriptionsfaktoren enthält, gefolgt von der Exposition der voll reprogrammierten iPS-Zelle gegenüber dem rekombinanten zellmembrangängigen TAT-Cre-Protein.
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Bild 3. Human-Exzision: Zeitverlauf der TAT-Cre-Behandlung (A). Einzelne Kolonien wurden an Tag 9...14 nach Behandlung ausgewählt und zur Durchführung der quantitativen Real-time-PCR direkt dem Lysepuffer hinzugegeben. Der Ct-Wert des WPRE in den exzidierten Proben sollte mit den Negativkontrollen, den unbehandelten humanen iPS-Zellen und der No-Template-Kontrolle korrelieren (B).