Exzision viraler Vektoren aus iPS-Zellen unter Verwendung von zellmembrangängigem TAT-Cre-ProteinEffiziente Gewinnung transgenfreier iPS-Zellen
In diesem Artikel beschreiben wir die effiziente Erzeugung von transgenfreien murinen und humanen iPS-Zellen durch Verwendung eines Cre-exzidierbaren polycistronischen lentiviralen Vektors, der die "Stammzellkassette" (STEMCCA™ cassette) exprimiert, die alle vier Transkriptionsfaktoren enthält, gefolgt von der Exposition der voll reprogrammierten iPS-Zelle gegenüber dem rekombinanten zellmembrangängigen TAT-Cre-Protein.
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Bild 4. Exzisionseffizienz von murinen STEMCCA™ Cre-exzidierbaren polycistronischen (OKSM) iPS-Zellen: Real-time-qPCR-Analyse der genomischen DNA. In den beiden gezeigten Experimenten wurde ΔCt > 5 als signifikante Differenz der DNA-Expressionsspiegel angesehen und weist auf eine erfolgreiche Exzision hin. Der Ct-Wert des WPRE in den exzidierten Proben sollte mit den Negativkontrollen, den unbehandelten humanen iPS-Zellen und der No-Template-Kontrolle korrelieren (B). Ähnliche Ergebnisse wurden erzielt, wenn murine iPS-Zellen unter Serum-freien, Feeder-freien Bedingungen (ESGRO®-2i Medium, EMD Millipore Kat. Nr. SF016, Daten nicht aufgeführt) kultiviert wurden.