Exzision viraler Vektoren aus iPS-Zellen unter Verwendung von zellmembrangängigem TAT-Cre-ProteinEffiziente Gewinnung transgenfreier iPS-Zellen
In diesem Artikel beschreiben wir die effiziente Erzeugung von transgenfreien murinen und humanen iPS-Zellen durch Verwendung eines Cre-exzidierbaren polycistronischen lentiviralen Vektors, der die "Stammzellkassette" (STEMCCA™ cassette) exprimiert, die alle vier Transkriptionsfaktoren enthält, gefolgt von der Exposition der voll reprogrammierten iPS-Zelle gegenüber dem rekombinanten zellmembrangängigen TAT-Cre-Protein.
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Bild 5. In-vitro- und In-vivo-Charakterisierung post-exzidierter Klone humaner iPS-Zellen. Post-exzidierte Klone (p17) exprimierten die entsprechenden pluripotenten Marker (A-D) und alkalische Phosphatase (Daten nicht aufgeführt) und besaßen einen normalen Karyotyp (E). Teratom-Analyse (F-I). Einzelne Subklone wurden zusammen mit gepoolten Subklonen ausgewählt und auf die Präsenz von Transgenen untersucht. Alle Subklone einschließlich der gepoolten Subklone zeigten nach 15 Passagierungsschritten eine vollständige Exzision, und ähnliche Ergebnisse konnten beobachtet werden, wenn die Expansion in einer Feeder-basierten Kultur erfolgte (J).