Der Raman-Effekt ist allerdings ein sehr schwacher Effekt; nur eines von einer Million der auf die Probe auftreffenden Photonen wird Raman-gestreut. Deshalb musste man früher für ein Spektrum oft minutenlang an einem Messpunkt integrieren. Das ist kein Problem, wenn man nur ein Spektrum aufnehmen will. Diese Methode war aber wenig attraktiv für die Generierung von Bildern mit Tausenden von Probenpunkten respektive Spektren. Lange Zeit war Raman-Mikroskopie deshalb nur für Spezialisten interessant. Das hat sich mit der Entwicklung leistungsfähiger konfokaler Raman-Mikroskope geändert [3]. Konfokalität ist eine der wichtigsten Maßnahmen, um Streulicht von außerhalb der Fokusebene auszublenden und somit das Verhältnis von Raman-Signal zu Untergrund zu erhöhen. Aber auch die Frequenz des verwendeten Lasers, die Konfiguration des Spektrometers und eine sehr leistungsfähige CCD-Kamera sind von entscheidender Bedeutung, um höchsten Lichtdurchsatz zu erreichen und damit kontrastreiche und aussagefähige Bilder zu generieren. Die modular aufgebauten Mikroskopsysteme von Witec können mit verschiedenen Laserwellenlängen arbeiten, die Optiken und Spektrometer sind für maximalen Lichtdurchsatz an den jeweiligen Laser angepasst. Damit benötigt man heute nur wenige Millisekunden für die Aufnahme des Spektrums eines Proben- bzw. Bildpunkts, für ein 100 mal 100 Pixel großes Bild also nicht einmal eine Minute.

Beispiel Schokolade

Mit zunehmendem Alter bilden sich auf Schokolade ein weißer, aus Fett bestehender Film sowie Poren auf der Oberfläche. Das ist ein größeres Problem für die Hersteller, weil solche Produkte nicht appetitlich aussehen und somit unverkäuflich sind. Schokolade besteht im Wesentlichen aus Fett (Kakaobutter), Wasser, Saccharose und Zusätzen. Mit Raman-Mikroskopie kann man die Verteilung dieser Substanzen visualisieren (Bild 1). Im Rahmen des EU-Projekts Propraline wurde mit konfokaler Raman-Mikroskopie und Raman-Tiefenscans entlang der z-Achse von Schokoladenproben gezeigt, dass an der Oberfläche sichtbare Aufwölbungen mehrere Mikrometer tief in die Schokolade hineinreichen und meistens aus Fett bestehen, während ebenfalls sichtbare Poren nur Luft enthalten [12] . Anscheinend fließt mit zunehmendem Alter der Schokolade deren Fett von der Matrix über Kanäle nach außen und hinterlässt die leeren Poren. Hier bietet sich ein Ansatz für weitere Entwicklung.