HPLC-Tipp - LABO | Labortechnik und Life Sciences

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HPLC-Tipp

Der Gehalt hatte gestimmt, die relative Standardabweichung war in Ordnung - warum gibt es jetzt dennoch Probleme?

Der Fall
In der Analytik werden zum Vergleich von Zahlenreihen nahezu ausschließlich der Mittelwert und die rel. Standardabweichung (Variationskoeffizient, Vk) herangezogen. Entsprechen diese zwei Zahlen den Anforderungen, wird alles als bestens erachtet. Dies kann sich jedoch als Trugschluss erweisen, in der Routine kann es dennoch zu Problemen kommen. Zweifel kommen auf, ob denn diese Kriterien vielleicht doch nicht ausreichen… Das kann in der Tat so sein, schauen wir uns nachfolgend einen möglichen Grund an.mehr...

Vom "Kult" der Bodenzahlen - oder was bewirkt eine hohe Bodenzahl?

Der Fall: In letzter Zeit machen die Sub-2-µm-Teilchen sowie die Fused Core Materials von sich reden. So wird gerne auf die hohen Bodenzahlen dieser Materialien hingewiesen und folglich auf die damit verbundene wesentlich bessere Trennung.mehr...

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Meistgelesene Artikel

Zwei Peaks in der Säule

Liebe Anwenderinnen, liebe Anwender,
es ist eine Weile her, dass wir von den zwei Peaks, Peaky und Chromy, etwas gehört haben. Heute jedoch sind die zwei recht ungleichen Freunde wieder beisammen: Zum Einen der kleine Peaky Säure aus Polarweiler, wie eh und je quirlig, ungeduldig, frech und mit einem für ihn typisch losen Mundwerk, welches man ihm leider nicht mehr abgewöhnen kann.

Sind ein kleines "Delay Volume" der Apparatur und/oder ein kleines Volumen der Mischkammer immer "gut"? Oder: Was ein paar "Mikroliterchen" alles bewirken können

Der Fall:
Im Zuge der Verbreiterung von U(H)PLC-Geräten warten die Hersteller mit immer kleineren Verweilvolumina (Verweilvolumen, auch: Verzögerungsvolumen, „Delay Volume“, „Dwell Volume“, das ist das Volumen von der Mischkammer bis zur Säule) bzw.

Unterschiede in den HPLC-Anlagen - die Peakfläche

Der Fall:
Dass Geräte von unterschiedlichen Herstellern große Unterschiede aufweisen können, ist eine HPLC-Binsenweisheit. Der Unterschied kann im Verweilvolumen bei Gradientenanlagen liegen (Hochdruck vs.

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Einstellparameter und Variationskoeffizient

Der Fall:
Einstellparameter wie Zeitkonstante („response time“, „time constant“), Peakwidth, Datenrateaufnahme („sample rate“), Bandwidth etc. können die Integration und somit Peakfläche und Befund stark beeinflussen.

Tipps rund um den Eluenten - 2. Teil

1. Von „Gebirgen“ in der Basislinie und von Läufen im Sommer und im Winter im Falle von ACN/Wasser-Eluenten

Der Fall:
Sagen wir, Ihnen ist aufgefallen, dass Sie im Sommer mit ACN/Wasser- bzw.

Tipps rund um den Eluenten

Liebe Anwenderinnen, liebe Anwender,

Die Kleinen im Sommer – gemäß dieser Tradition werden Sie in den Monaten Juni, Juli/August an dieser Stelle kurze, „knackige“ HPLC-Tipps vorfinden.

Überprüfung der Säulenstabilität in der RP-HPLC

Der Fall:
In der Routine werden AnwenderInnen immer wieder mit folgender Situation konfrontiert: Die Lebensdauer manch einer Säule lässt zu wünschen übrig.

Das kann mit der Probe in der Säule passieren

Der Fall:
Kieselgel ist ein sehr guter Feststoffkatalysator, es wird vielfach in der chemischen Industrie eingesetzt. In der RP-Chromatographie nun, wo ja Kieselgel die mit Abstand wichtigste Matrix darstellt, führt seine Umsetzung mit Silanen aufgrund von sterischen Effekten zu einem Umsetzungsgrad von lediglich rund 50.

Integration von Peaks auf einer driftenden Basislinie

Der Fall:
Bei Gradiententrennungen oder im Falle von Matrix-belasteten Proben müssen oft Peaks, die sich auf einer mehr oder weniger stark driftenden Basislinie oder auf einem flachen „Buckel“ befinden, integriert werden.

Effektives Spülen einer RP-HPLC-Säule

Dass eine HPLC-Säule ab und zu gespült werden muss, ist eine Binsenweisheit. Nur, wie macht man so etwas effektiv? Es soll gründlich und es soll auch ökonomisch sein.

Der HPLC-Tipp

Liebe Leserinnen, liebe Leser,

wir haben es geschafft und einige von uns sind womöglich auch selbst geschafft: Ein nicht ganz gewöhnliches Jahr neigt sich dem Ende zu. Zeit, sich etwas Zeit zu nehmen und vielleicht das eine oder andere zu reflektieren. Vergessen Sie für einen Moment die rein fachlichen Dinge und begleiten wir gemeinsam den kleinen POL Ari auf einer seiner Abenteuerreisen.

Wenn U(H)PLC als U(H)PLC genutzt werden soll

Der Fall:
Seit Einführung der UPLC von Waters im Jahre 2004 haben mehrere Anbieter nachgezogen, und in der Zwischenzeit wird eine ganze Reihe von UHPLC-, Fast-LC-, RRLC-, usw.

ACN-Knappheit - wie hat der Markt darauf reagiert?

Der Fall:
Vor knapp einem Jahr schockierte die plötzlich aufgetretene ACN-Knappheit den Markt. An dieser Stelle im Januar, aber auch in Broschüren und auf den Webseiten nahezu aller großen Anbieter wurden diverse Vorschläge zur (M)Linderung des Problems diskutiert.

Der HPLC-Tipp

Im Juni-Tipp haben wir uns mit der Verschiebung der Retentionszeit beschäftigt, die Ursachen lagen in einer Veränderung der stationären Phase im Sinne der „Chemie“.mehr...

Verschiebung der Retentionszeit

Die „Kleinen“ im Sommer…

Liebe Leser,

wie in jedem Sommer werden wir uns auch heuer in den Monaten Juni bis August mit kleinen, leicht „bekömmlichen“ HPLC-Tipps beschäftigen. Im Juni- und im Juli-Tipp geht es um eine unerwartete Verschiebung der Retentionszeit, d.

"Trennleistung", "Effizienz", "Bandenverbreiterung", das alles bedeutet doch fast das gleiche - oder?

Der Fall:
Betrachten wir die drei Säulen: 250 mm/5 µm, 150 mm/3 µm und 75 mm/1,5 µm. Mit Hilfe der empirischen Formel: Bodenzahl = 3000 x Länge der Säule (in cm) durch Teilchengröße (in µm) stellen wir leicht fest, dass alle drei Säulen – vorausgesetzt sie sind gleich gut gepackt – die gleiche Bodenzahl, nämlich 3000 x 5 = 15000 Böden liefern.

Wie kann die Bodenzahl erhöht werden?

Der Fall:
In einem der nächsten HPLC-Tipps werden wir uns über folgenden Fakt unterhalten: Eine Erhöhung der Selektivität stellt mit Abstand die effektivste Maßnahme dar, um die Auflösung zu verbessern.

Einfluss von Einstellparametern auf die Trennung

Im vergangenen November ging es bei unserem HPLC-Tipp um den Einfluss von Einstellparametern auf die Peakform und damit auch auf die Auflösung.

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