Liebe HPLC-Anwenderinnen, liebe HPLCAnwender, letzten Monat fanden in Frankfurt wie alle Jahre wieder die NOVIA-"HPLC-Tage" statt. Nichts ahnend, habe ich nicht schlecht gestaunt, als auf einmal Peaky und Chromy vor mir standen – die zwei alten Freunde wollten mal bei der Veranstaltung vorbei schauen, sagten sie. Die Überraschung war für mich riesig und da ich zufällig unmittelbar bei ihnen in der Nähe stand, habe ich ungewollt ihr Gespräch gelauscht.
mehr...Manch ein Peak eluiert auf einer Flanke. Die Flanke kann u.a. ein abfallender Gradient, ein sehr langsam eluierender Peak oder einfach Matrix sein. Angenommen, das Problem ist chromatographisch nicht zu lösen, wie könnte man vorgehen, um den Fehler bei der Bestimmung der Peakfläche zu minimieren?
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Der HPLC-Tipp im Januar/Februar
Liebe Leser, im Dezember-Tipp hatte ich Ihnen vom Gespräch zwischen Peaky und Chromy erzählt. Nachfolgend noch einmal das Gespräch zur Erinnerung und anschließend die richtigen Antworten.
mehr...Wenn der Fluss sich ändert, ändert sich auch die Peakform – mal stärker, mal schwächer. So weit, so gut. Was machen nun die Peakhöhe und die Peakfläche? Ändern sie sich ebenso und wenn ja, ist dies merklich? Was wären schließlich die Konsequenzen?
mehr...Die Auflösung wird als das wichtigste Kriterium für die "Güte" einer Trennung angesehen. So wird oft eine Mindestauflösung verlangt, auch werden Auflösungen zum Methodenvergleich herangezogen. Es ist nun so, dass es mehrere Formeln für die Auflösung gibt, die alle mehr oder weniger benutzt werden. Es liegt somit auf der Hand, dass Ergebnisse nicht immer vergleichbar sind. Es stellt sich jetzt die Frage: Wie stark können sich Werte unterscheiden, wenn zu deren Ermittlung unterschiedliche Formeln zugrunde liegen?
mehr...In der Pharmabranche werden vielfach Monographie-Methoden verwendet, somit sind für die Anwender dort Vorgaben der europäischen und der US-Pharmakopöe von Relevanz. Das Kapitel 621 zur Chromatographie in der USP ist nun überarbeitet worden, man konnte Kommentare zum Entwurf bis zum 31. Mai 2012 einreichen. Somit werden in Kürze die neuen Vorgaben in Kraft treten. Ich werde im vorliegenden HPLC-Tipp die Wichtigsten vorstellen.
mehr...Bekanntlich befindet sich auf den Säulen ein Pfeil, folglich kann die Säule in Pfeilrichtung richtig eingebaut werden. Wenn ich nun in meinen Seminaren empfehle, bei Bedarf die Säule umzudrehen, ernte ich vielfach misstrauische Blicke; das ist bei weniger erfahrenen Kolleginnen und Kollegen völlig verständlich. Also direkt die Frage: Kann/sollte man die Säule umdrehen? Um gleich noch vor der Erklärung eine Antwort zu geben: Ja, bis auf eine Ausnahme eindeutig ja! Diese Maßnahme kann nämlich mit zwei positiven Aspekten in Verbindung gebracht werden:
mehr...Wir wissen alle, was der Unterschied zwischen isokratischen und Gradiententrennungen ist: Bei isokratischen Trennungen bleibt die Zusammensetzung des Eluenten während der Gesamttrennung konstant, bei Gradiententrennungen erhöht sich permanent die Elutionsstärke. So nimmt beispielsweise bei RP-Trennungen vom Anfang bis zum Ende des Laufs der MeOH- bzw. ACN-Anteil der mobilen Phase zu – die Wechselwirkungen zwischen Eluent und stationärer Phase nehmen ebenfalls zu – und die Peaks werden nach vorne "geschoben". So weit so gut. Wo liegen nun aus praktischer Sicht die Unterschiede zwischen beiden Trennmodi?
mehr...Zweifelsohne muss gewährleistet sein, dass eine HPLC-Anlage technisch „in Ordnung“ ist, der Beweis ist in regelmäßigen Abständen zu erbringen. Dennoch drängt oft die Zeit, häufige/unnötige Überprüfungen sind kontraproduktiv. Es ist nun so, dass in stark reglementierten Bereichen das „wie“ und „wie oft“ mehr oder weniger vorgegeben sind, eine Änderung der Ist-Praxis ist de facto kaum möglich. In anderen Bereichen allerdings sind Spielräume vorhanden; sinnvolle, effektive Überprüfungen sind realisierbar. Nachfolgend werde ich versuchen darzustellen, welche Tests aus analytischer Sicht Sinn machen und welche Kriterien für welche Fragestellung gelten könnten.
mehr...Als Kinder haben wir folgendes Spiel gespielt: Man nennt eine Zahl und jeder soll möglichst viele Gegenstände, Menschen etc. nennen, die dieser Zahl entsprechen und die - belegbar - mit seiner Person zu tun haben, z.B. 4 Brüder, die 4 ältesten Superman-Farbheftchen, die 4 kleinsten Spickzettel, usw. Derjenige hat logischerweise gewonnen, der die größte Anzahl bzw. bei „Stich“ die exotischsten, aber realen "4er-Gruppen" nennen konnte. Versuchen wir es doch in abgewandelter Form in der HPLC und nehmen wir als Beispiel die "3". Was könnte man nun mit der "3" verbinden - Vernünftiges, Übliches, Unsinniges, Sinnvolles?
mehr...Der HPLC-Tipp im Januar/Februar
Es werden stets neue Säulen in den Markt eingeführt. Die Bezeichnungen sind oft Fantasienamen, vom jeweiligen Firmenmarketing kreiert. Oft jedoch erhält man durch den Namen bzw. die verwendete Abkürzung Hinweise auf Eigenschaften des Materials oder auch seine (vermeintliche) Eignung für bestimmte Trennprobleme. Nachfolgend einige Beispiele für solche Namensgebungen:
mehr...Nehmen wir mal folgendes „Liebespaar“ an: „Sie“ ist klein, schlank und hat´s von Natur aus eilig. „Er“ dagegen ist je nach Situation langsam, recht unberechenbar, aber auch sehr experimentierfreudig.
mehr...Der Fall
Als HPLC-Anwender weiß man, dass die präzise Herstellung von Eluent und Probenlösung eine elementare Grundvoraussetzung für reproduzierbare Ergebnisse ist.
mehr...Der Fall
Auch nach ca. 40 Jahren kommerziell erhältlicher HPLC-Säulen werden fortan neue stationäre Phasen eingeführt – und dies mit ungebremster Intensität.
mehr...Der Fall
Sie befinden sich gegen Ende Ihrer Optimierungsbemühungen: Sie haben eine neue Methode entwickelt oder eine bestehende verbessert.
mehr...Wir haben an dieser Stelle uns des Öfteren über die Injektion unterhalten, aber: Diese Story ist eine unendliche… Heute möchte ich auf Probleme mit der Reproduzierbarkeit eingehen und auf einige Sachen hinweisen, die man im Alltag vielleicht bedenken sollte.
mehr...Amerikaner mag ich – meistens jedenfalls. Denk- und Handlungsweise sind leicht nachvollziehbar, jene rational zu belegen nicht immer einfach. Wie auch immer, Manches ist nun so wie es ist, man muss es nur wissen und es akzeptieren. Es gilt die Konsequenzen zu ziehen und Vorsicht walten zu lassen. Wir sind bei den „Kleinen“, deswegen beschränke ich mich hier auf einige mögliche Missverständnisse und Fallstricke in äußerst knapper Form. Ich habe solche gewählt, die sowohl die analytische Praxis als auch das analytische Verständnis im Allgemeinen adressieren:
mehr...Der Fall
Mit einigen Anwendern habe ich vor Ort ein paar einfache Optimierungsexperimente durchgeführt. Wir haben einiges ausprobiert, nachfolgend werden ein, zwei Ergebnisse vorgestellt.
mehr...Der Fall
Die oben genannten Einstellparameter beeinflussen die Integration – und somit die Peakfläche –, aber auch die Streuung der Werte bei Wiederholmessungen (siehe dazu HPLC-Tipp vom September 2010).
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